筑波大学生命環境系(下田臨海実験センター)の谷口俊介准教授、谷口順子研究員、大学院生命環境科学研究科博士課程後期2年鈴木智佳(日本学術振興会特別研究員)は、国立遺伝学研究所遺伝情報分析研究室の池尾一穂准教授、金城その子研究員、お茶の水女子大学基幹研究院の清本正人教授、広島大学大学院统合生命科学研究科の山本卓教授との共同研究により、ハリサンショウウニ(Temnopleurus reevesii)を用いて、ノックアウトウニの系統作製に成功しました。
ウニは採集しやすく、卵や精子といった配偶子も取得が容易なので、発生生物学や细胞生物学、进化学の优れた研究材料として长く生命科学の现场で使われてきました。しかし、世代交代周期が1?2年と长いため、遗伝子変异系统などを利用して正确な遗伝子机能の解析を试みる遗伝学の导入が见送られていました。本研究では、ウニ研究に导入可能な遗伝学的手法を模索する过程で、ハリサンショウウニが约半年という比较的短い期间で世代を回せることを発见し、その性质を利用してノックアウトウニを作製しました。
具体的には、ゲノム编集技术の颁搁滨厂笔搁-颁补蝉9システム(※2)を用い、体の色素合成に必要なポリケチド合成酵素(Polyketide Synthase; Pks1)の遺伝子領域に欠損を誘導し、色素を失ったハリサンショウウニのアルビノ個体を作製しました。さらに、それらの子孫を掛け合わせることで、ホモ接合型(※3)ノックアウトウニを作製することに成功しました。これにより、ウニを用いた研究に、分子遗伝学の手法を导入することが可能であることが証明されました。今后、より正确な遗伝子の机能解析や発现调节解析等が进むことが期待されます。
本研究の成果は、米国の学術誌「Current Biology」で公開される予定です。
※本研究はJSTさきがけ(多細胞)、日本学術振興会科学研究費若手研究(2019-21)と特別研究員奨励費(17-19及び19-21年度)、AMED創薬等先端技術支援基盤プラットフォーム (2017)、東レ科学技術研究助成金(2018)、武田科学振興財団ライフサイエンス研究奨励(2015)によって実施されました。
贵2世代の正常型(左)と笔办蝉1ホモ接合型変异体(右)
(※1) 系統
交配や継代を繰り返して遗伝形质が均质になったグループを本来は指す。ここでは、ある程度継代を続けたウニに対し、ゲノム编集を加え2世代饲育したものを便宜的に系统としている。
(※2) CRISPR-Cas9システム
ゲノム顿狈础の一部に相补的な塩基配列を持つガイド搁狈础(蝉驳搁狈础)と颁补蝉9ヌクレアーゼを细胞や卵内に导入することで、蝉驳搁狈础の标的部位に二重锁切断を引き起こします。この切断部位が生物本来の性质により修復される过程で、欠损や挿入などの変异を生じます。この性质を利用してゲノム顿狈础の标的领域に人為的に编集を加える技术です。
(※3) ホモ接合型変異体、ヘテロ接合型変異体、野生型ある遺伝子座が同じ対立遺伝子からなる状態をホモ接合体と呼ぶ。一方、異なる対立遺伝子からなる状態をヘテロ接合体と呼ぶ。ここでは、1対あるPks1遺伝子の両方に変異の入った状態がホモ接合体変異体、片方のみに変異の入った状態をヘテロ接合型変異体、どちらも変異の入っていない状態を野生型としている。